Χρώση May Grunwald – Giemsa

Περιλαµβάνει ένα µείγµα χρωστικών, όπως:

• µπλε του µεθυλενίου: βάφει µπλε τα όξινα συστατικά του κυττάρου
  
• κυανό (azure): βάφει κόκκινα και µώβ τα βασικά κυτταρικά συστατικά
  
• εωζίνη (ηωσίνη):βάφει πορτοκαλί-κόκκινα τα αλκαλικά συστατικά του κυττάρου.
  

Αυτή η χρώση χαρακτηρίζεται ως πανοπτική, επειδή βάφει όλα τα κυτταρικά συστατικά. Επειδή η τιµή του pH είναι πολύ σηµαντική για τις ιδιότητες χρώσης, οποιαδήποτε αλλαγή του pH θα οδηγήσει σε λανθασµένη αντίδραση χρώσης. Τα όρια βέλτιστου pH
είναι µεταξύ 6.5 και 6.8.

Υλικά:

επίχρισµα κυττάρων αίµατος, δοχεία και στατώ για χρώση, χρωστική May-Grünwald, χρωστική Giemsa, απεσταγµένο νερό

Μέθοδος

• Βυθίζουµε την αντικειµενοφόρο µε το επίχρισµα αίµατος στο δοχείο µε τη χρωστική May-Grünwald.
  
• Παραµονή 5 min σε θερµοκρασία δωµατίου.
  
• Προετοιµασία του διαλύµατος Giemsa: Διαλύουµε 5 ml χρωστική Giemsa σε 50 ml απεσταγµένο νερό στο δοχείο χρώσης.
  
• Ξεπλένουµε το επίχρισµα βυθίζοντας το και ανακινώντας το σε νερό, και το µεταφέρουµε στη συνέχεια στο δοχείο µε τη διαλυµένη χρωστική Giemsa.
  
• Παραµονή 15 min σε θερµοκρασία δωµατίου.
  
• Ξεπλένουµε καλά µε νερό (βυθίζοντας και ανακινώντας µέσα σε δοχείο νερού).
  
• Στεγνώνουµε τις πλάκες στον αέρα.
  
• Παρατηρούµε στο µικροσκόπιο µε καταδυτικό φακό (100 x) κάτω από
  σταγόνα ελαίου.
  
• Εξέταση των επιχρισµάτων: Τα κόκκινα κύτταρα είναι ερυθροκύτταρα, τα κύτταρα µε ιώδη πυρήνα είναι λευκοκύτταρα. Εξετάζουµε 100 λευκοκύτταρα και τα κατατάσσουµε ανάλογα µε τον τύπο τους σε:
  
  
  
  • πολυµορφοπύρηνα ουδετερόφιλα (ταινιοειδή και τετµηµένα)
    
  • εωζινόφιλα
    
  • βασεόφιλα
    
  • λεµφοκύτταρα
    
  • πλασµατοκύτταρα
    
  • µονοκύτταρα
    

Αποτελέσματα

Στη χρώση αυτή βάφονται µπλε το RNA, το κυτταρόπλασµα και οι πυρηνίσκοι. Το DNA και τα πρωτογενή κοκκία βάφονται
κόκκινα και µωβ, καθώς και πορτοκαλί-κόκκινα η αιµογλοβίνη και τα εωζινοφιλικά κοκκία.

Σχετικό βίντεο της χρώσης από τη σελίδα REGNVM PROKARYOTAE.

Πηγή: Εργαστηριακή άσκηση Ανοσοβιολογίας, (Αικατερίνη Χλίχλια, Επίκουρος Καθηγήτρια Μοριακής Ανοσολογίας. Τμήμα Μοριακής Βιολογίας και Γενετικής του Δ.Π.Θ.)
Ενδιαφέρον έχει να διαβάσετε και το παρακάτω άρθρο:
Προσέγγιση στη διάγνωση από το επίχρισμα του περιφερικού αίματος (iatriki-gr.net)
Δείτε επίσης την διαδικάσία της χρώσης May Grunwald – Giemsa στα αγγγλικά
Giemsa (May-Grunwald) Staining Procedure

πηγή: http://www.bmlabs-mag.gr