Μικροτόμος Παραφίνης (paraffin microtome)

Μικροτόμος Παραφίνης (paraffin microtome)

Τι είναι ο Μικροτόμος Παραφίνης

Ο μικροτόμος είναι εργαστηριακή συσκευή που χρησιμοποιείται για να επιτευχθεί, ξεκινώντας από ένα μικρό τμήμα ιστού ή οργάνου, σταθεροποιημένο και βυθισμένο στην παραφίνη ή σε ρητίνη διάφορων τύπων, λεπτές τομές, πάχους μεταξύ 3 και 10 χιλιοστών, ώστε να υποβληθεί σε μικροσκοπική ανάλυση. Ο μικροτόμος συνδυάζει μια εγκάρσια κίνηση σε σχέση με μια κόψη λεπίδας συνήθως από χάλυβα, και με μια πρόοδο σε σχέση με αυτή· Η σημασία αυτής της προόδου καθορίζει το πάχος της τομής. Υπάρχουν δύο κύριοι τύποι μικροτόμου: με κύλιση και περιστροφική. Τα τελευταία χρόνια εισήχθησαν μικροτόμοι αυτόματοι και πάντα πιο συχνά γίνεται χρήση λεπίδων γυαλιού.

Επεξεργασία του ιστού

Για να μπορέσουμε να πάρουμε μια λεπτή τομή με τη χρήση μικροτόμου, οι ιστοί θα πρέπει μετά τη μονιμοποίηση να διηθηθούν με μια ουσία που θα δώσει μια σταθερή συνοχή, απαραίτητη για το κόψιμο. Αυτό επιτυγχάνεται συνήθως με τον εμποτισμό του ιστού σε παραφίνη, αλλά και σε άλλες ουσίες όπως ζελατίνη, κυτταρίνη, παραφίνες ή άλλα πλαστικά υλικά. Οι εμποτισμένοι στην παραφίνη ιστοί μπορούν να κοπούν σε πάχος 3 – 10 μ (συνήθως 6 – 8 μ) και στη συνέχεια να παρατηρηθούν σε οπτικό μικροσκόπιο. Ρητίνες του epoxy τύπου (Epon ή Araldite)
χρησιμοποιούνται συνήθως για το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο.

Στην επεξεργασία του ιστού πριν την σκήνωση (εμποτισμό) προηγούνται 2 κύριες φάσεις: η αφυδάτωση και η διαύγαση (καθάρισμα). Ο υγρός μονιμοποιημένος ιστός δεν μπορεί να επεξεργαστεί κατευθείαν με παραφίνη, αν δεν αφαιρεθεί πρώτα το νερό. Αυτό επιτυγχάνεται με διαδοχικά βαπτίσματα σε βαθμιαίες σειρές από μίγματα αιθανόλης με νερό (συνήθως από 70% μέχρι 100%). Μετά η αιθανόλη αντικαθίσταται από ουσίες που διαλύουν το λίπος. Καθώς οι ιστοί εμποτίζονται με το διαλυτικό γίνονται συνήθως διαφανείς και για αυτό το λόγο η φάση αυτή καλείται διαύγαση ή ξαστέρωμα ή καθάρισμα. Στη σκήνωση με παραφίνη το σύνηθες διαλυτικό που χρησιμοποιείται είναι η ξυλόλη (xylene). Άλλα διαλυτικά είναι τα toluene (έχει πολύ καλή δράση, αλλά είναι 3 φορές πιο ακριβό από τη ξυλόλη), methyl salicylate (έχει ευχάριστη οσμή, αλλά υψηλό κόστος), limolene και Clearite.

Όταν ο ιστός εμποτισθεί με το διαλυτικό τοποθετείται στη συνέχεια σε λιωμένη παραφίνη (58 - 60 °C). Η θερμότητα έχει σαν αποτέλεσμα να εξατμίζεται το διαλυτικό και οι χώροι που αδειάζουν να γεμίζουν με παραφίνη. Αυτή είναι η διεργασία του εμποτισμού ή σκήνωση.
Εναλλακτικά της παραφίνης χρησιμοποιούνται διάφορα πλαστικά, όπως methyl methacrylate, glycol methacrylate, araldite, and epon που επιτρέπουν την δημιουργία λεπτότερων τομών.

Δημιουργία τομών

Τα μικρά κομμάτια της παραφίνης που περιέχουν τους ιστούς κόβονται στη συνέχεια με την ατσάλινη λεπίδα του μικροτόμου σε πάχος από 1-20 μm (συνήθως 3-8 μm).

Στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, είναι απαραίτητες ακόμη λεπτότερες τομές (0,02-0,10 μm) γι’αυτό ο εμποτισμός γίνεται με σκληρή epoxy ουσία. Όταν ετοιμαστούν οι τομές, τοποθετούνται σε υδατόλουτρο και στη συνέχεια σε γυάλινες αντικειμενοφόρους. Οι αντικειμενοφόροι
τοποθετούνται σε φούρνο για περίπου 15 min έτσι ώστε να υποβοηθηθεί η προσκόλληση της τομής. Σε περίπτωση εξέτασης αντιγόνων (ανοσο-ιστοχημία) το στάδιο αυτό παραλείπεται και χρησιμοποιούνται ειδικές κόλλες. Ο εμποτισμός των ιστών σε ξυλόλη διαλύει τα λιπίδια του ιστού, γεγονός που είναι μια ανεπιθύμητη δράση όταν αυτά τα στοιχεία πρόκειται να μελετηθούν. Για την αποφυγή αυτού του
προβλήματος χρειάζεται να χρησιμοποιηθεί ένας ειδικός ψυκτικός κρυοτόμος (κρυοστάτης), που επιτρέπει την σκλήρυνση του ιστού σε χαμηλές θερμοκρασίες, χωρίς να περάσουν από διεργασία εμποτισμού σε παραφίνη.

Με μια μικρή αναζήτηση στο διαδίκτυο θα βρείτε πολλούς τύπους μικροτόμων.

Ενδεικτικά παραθέτω έναν μικροτόμο

Υπεραυτόματος Περιστροφικός Μικροτόμος SLEE CUT 6062

Περιστροφικός υπεραυτόματος μικροτόμος, νεότατης τεχνολογίας, κατάλληλος για τομές παραφίνης και για εφαρμογές στην έρευνα και τεχνολογία, σταθερός, υψηλής ακρίβειας.


Τεχνικά χαρακτηριστικά

Μηχανοκίνητη προώθηση/επαναφορά του δείγματος.
Μηχανοκίνητη αδρή και μικρομετρική προώθηση του δείγματος.
Ρυθμιζόμενη επαναφορά δείγματος στην επιθυμητή θέση κοπής, έως 200μm.
Οι λειτουργίες του μικροτόμου ρυθμίζονται από τον πίνακα ελέγχου ή τον ποδοδιακόπτη.
Διαθέτει πίνακα πλήκτρων αφής για τη ρύθμιση της κοπής και την προώθηση/ επαναφορά του δείγματος.
Δύο ταχύτητες αυτόματης προώθησης δείγματος.
Επιτρέπει μεμονωμένες τομές ή συνεχόμενες.
Δυνατότητα επιλογής τελικής θέσης δείγματος πάνω ή κάτω.
Ταχύτητα κοπής ρυθμιζόμενη από 3 έως 300mm/sec.
Ηλεκτρονική ρύθμιση του πάχους των τομών από 0.5μm έως 300μm με προκαθορισμένα βήματα (0.5 – 1.0 – 2.0 – 5.0 – 10.0μm).
Εύρος κάθετης κοπής 60mm.
Οριζόντια προώθηση δείγματος 28mm.
Προσανατολισμός δείγματος ±8° κατά τους άξονες Χ/Υ καθώς και δυνατότητα πλήρους περιστροφής του στον άξονα Ζ.
Μέγεθος του υπό κοπή δείγματος έως και 50 x 50mm καθώς και κατά επιλογή δυνατότητα χρήσης υποδοχέα δείγματος σταθερού μεγέθους.
Ρυθμιζόμενο trimming από 1μm έως 300μm.
Ψηφιακή ένδειξη του πάχους τομής, του πάχους τομής κατά τη διάρκεια του trimming, καθώς και του αριθμού περιστροφών ανά λεπτό.
Διαστάσεις 510 x 430 x 290mm.
Δίσκος συλλογής υπολειμμάτων.

Δείτε εδώ μία πολύ ωραία εργασία του Λέκτορα Παυλίδη Μιχάλη ( Πανεπιστήμιο Κρήτης - τμήμα βιολογίας). Για το συγκεκριμένο θέμα έχουμε πάρει πληροφορίες από την εργασία του.
ΙΣΤΟΛΟΓΙΑ

Πηγή:
Μερικές πληροφορίες για το συγκεκριμένο θέμα βρήκα εδώ http://www.oodegr.com/oode/asynithista/sarka1.htm